Observación al microscopio bacterias del yogurt

0:09 Hola, hoy vamos a hacer la práctica de visualización al microscopio de las bacterias del yogur. El yogur es un alimento que ingerimos todos los días y contiene bacterias vivas. Concretamente tiene dos tipos de bacterias, Lactobacillus vulgaricus y Streptococcus thermophilus. Estas bacterias son probióticas y ayudan a nuestra salud intestinal. Bien, lo primero que vamos a hacer es coger un yogur y lo pondremos en un portaobjetos. Haremos una pequeña extensión en un portaobjetos, fijaremos a la llama unos segunditos y posteriormente haremos la tinción con azul de metileno, que es una tinción simple. Haremos unos lavados en el portaobjetos

0:56 y cuando lo tengamos preparado pondremos un cubre de objetos encima y procederemos a la visualización en el microscopio. Vamos a abrir el mechero Bien, los yogures vienen de fábrica esterilizados pero las bacterias siguen todavía vivas. Por lo tanto, como he dicho antes, estamos ingiriendo bacterias vivas a través de un alimento y por eso contribuye a mejorar nuestra microbiota intestinal. Lo que vamos a hacer ahora es, con una asa de siembra,

1:43 flamearla. Esto quiere decir que se debe de poner incandescente. Con este pequeño mechero nos va a costar un poquito. Y con esto lo que hacemos es eliminar cualquier resto de microorganismo que podamos tener en el asa. Dejaremos que se enfríe unos segundos, siempre cerca de la esfera de esterilidad que nos da la llama. Y abrimos el yogur. Realmente necesitamos muy poquito yogur, de hecho únicamente con el suero ya

2:32 tendríamos bastante. Cogemos el portaobjetos y hacemos una pequeña extensión. Esterilizamos de nuevo el asa de siembra para eliminar los restos que nos hayan quedado de suero del yogur. Y a continuación lo que vamos a hacer es poner una pinza en el portaobjetos

3:23 y fijar la preparación a la llama. Como he puesto muy poquito, esto nos lleva muy pocos segundos. Hay que tener precaución de no acercar demasiado el portaobjetos a la llama porque podríamos quemar la preparación y en el caso de que hayamos cogido un poquito más de yogur que yo, que he cogido solamente suero, veríamos una caramelización de los azúcares y el porta se echaría a perder.

4:09 Una vez vemos que ya está seca, tapamos el mechero y lo retiramos. A continuación vamos a coger un cristalizador y unos puentes de tinción para proceder a la tinción de la muestra. La vamos a poner así y en este caso vamos a utilizar azul de metileno que lo tengo en este tubo Eppendorf concentrado y cogeremos con cuidado y con una pipeta Paster el colorante buscando depositarlo sobre la muestra

5:03 y esperaremos dos minutos. Mientras esperamos los dos minutos, os comentaré que si en el caso de que hayáis cogido mucha cantidad de yogur, es conveniente desgrasar la muestra con etanol al 96%, es decir, hacer unos pequeños lavados con etanol al 96% antes de poner el colorante, porque de esa forma reduciremos la interferencia de la grasa de yogur en la visualización. Continuamos, más o menos ya habrán pasado los dos minutos. Lo que hacemos ahora es lavar con agua destilada el porta, para eso necesitamos el cristalizador.

6:01 Lo apartamos. y dejamos secar al aire. Podemos ayudar un poco. secamos con cuidado y antes de poner el portaobjetos en el microscopio tenemos que

6:48 cubrirlo con un pequeño cristalito que se llama cubreobjetos. Conviene que esté limpio también. Lo podemos Enjuagar un poco con agua destilada. Y lo depositamos con cuidado sobre la preparación.

7:38 Bien, pues ahora ya podemos desplazarnos hasta el microscopio y proceder a la visualización. Bien, pues tenemos el microscopio y lo primero que tenemos que hacer es encenderlo con el interruptor de detrás. La preparación la habremos puesto en la pletina que tiene una pinza para sujetarla y el microscopio inicialmente tenemos que tener la preparación lo más baja posible, es decir, la pletina tiene que estar lo más baja del todo, en posición más baja. Para poder visualizar las muestras, el microscopio consta de cuatro objetivos de aumento y dos oculares.

8:28 Para empezar la visualización, como digo, tiene que estar el tornillo totalmente bajado y el objetivo con el mínimo aumento. Cuando ya lo tenemos puesto en el soporte, subimos la preparación hasta que ya no podemos más con el tornillo macrométrico que es el que sube la pletina y con el tornillo micrométrico que es este de aquí ajustamos hasta poder enfocar algo en el campo visual. Se tiene que ver con nitidez aunque con estos aumentos no vamos a visualizar correctamente las bacterias todavía. Cuando tenemos el campo enfocado ya podemos cambiar de aumento. El primero sería el de

9:17 4x, 4 aumentos, el siguiente el de 10x. A partir de ese momento conviene que solo toquemos el micrométrico para no descentrar la preparación. En este campo ya se pueden visualizar las bacterias, están muy lejos, por lo tanto nos aproximaremos con el siguiente objetivo de aumento que es el de 40x. y siempre con mucho cuidado muy lentamente iremos ajustando el plano. Podemos jugar también con la cantidad de luz que pasa a través del microscopio que la regulamos por un tornillo que tenemos en la parte de abajo, por una rueda mejor dicho, y con la apertura del diafragma y el condensador que tiene

10:07 el microscopio. La idea es ver las bacterias ceñidas con la mayor resolución y nitidez posible. Jugando con todas estas variables tenemos que encontrar el punto óptimo de visualización. En este plano ya se ven. Y por último pasaríamos al objetivo de inmersión. Es un objetivo de 100 por y requiere de un aceite de inmersión del cual le ponemos una gotita con una pipeta pastel. Posteriormente hay que limpiar los objetivos.

11:08 En este caso tengo que volver a aumentar la luz. y con un poco de paciencia conseguimos ver nítidamente las bacterias lácticas. Si veis alguna bacteria moviéndose es porque la preparación tiene algo de agua y fluye y hace que las bacterias se desplacen, pero en principio están bastante inmovilizadas en la matriz del yogur.

12:03 Deberíamos poder visualizar los dos tipos de bacterias, los streptococos, que son redondos y tienen forma de cuenta de collar porque suelen ir unidos en forma de pequeñas cadenas y los lactobacilos que son más alargados y menos abundantes. Bien, pues esto ha sido la práctica de hoy. Espero que os haya gustado la visualización de las bacterias lácticas en el yogur. Nos vemos en la siguiente práctica.