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0:04 Bienvenidos a esta clase en la que vamos a estudiar los métodos de estudio que utilizamos para valorar la hemostasis como sabemos existen errores en la etapa preanalítica y se sabe que en el laboratorio general en esta etapa suceden entre el 51 y el 71% de los errores del laboratorio y no queda fuera el laboratorio de hemostasis que se encuentran errores hasta 75% las etapas que conocemos en el proceso del laboratorio requieren control y monitoreo de la fase preanalítica y existen normas que nos sirven para la acreditación y
0:49 certificación de los laboratorios donde está incluida la etapa preanalítica Y cómo esta debe ser regulado como es la ISO 15.189 del 2003 entre otras a su vez existen normas que establecen el manejo de las muestras para realizar los estudios de mostazas como son las normas del clsi las normas francesas e italianas y en Argentina las recomendaciones del grupo K existen variables preanalíticas en los estudios de hemostasis de acuerdo al proceso preanalítico al que estamos del que estamos hablando y el riesgo que podemos encontrar por ejemplo cuando estamos en la toma de la muestra puede
1:37 ser que la preparación del paciente sea inadecuada que no se le hayan dado las indicaciones correspondientes para los estudios que la técnica de extracción sea deficiente que él tuvo para recolectar la muestra sea la adecuada inadecuado que se haya llenado mal o que el mezclado u homogeneizado haya sido insuficiente en lo que respecta al transporte y almacenamiento de la muestra va a depender mucho del tiempo de la temperatura y las condiciones de almacenamiento en la preparación del plasma la centrifugación en la temperatura de centrifugación en tiempo y la velocidad de centrifugación son importantes también el fraccionamiento del y en la manipulación del plasma la temperatura en el que vamos a conservar
2:22 este plasma y el descongelamiento del mismo Para ser utilizado las indicaciones que le vamos a dar a los pacientes para realizarse los estudios de mostasis son que deben tener un ayuno Entre cuatro a seis horas dos horas en los niños y se deben evitar lácteos y grasas el día anterior también se debe evitar el ejercicio físico intenso porque este aumenta el factor 8 y el factor bombín también evitar el estrés porque aumentan también el factor ocho y el factor bombilebral para los estudios de fibrinolisis se recomienda que la extracción sea entre las ocho y las diez de la mañana porque en la tarde aumenta el activador tisular del carminógeno cuando se quiera realizar la extracción para heparinemia O sea dosificar la
3:09 heparina se debe hacer cuatro horas post inyección de la heparina de bajo peso molecular existen distintas variaciones o situaciones fisiológicas que pueden alterar también los estudios y también la medicación que según indicación médica el paciente va a recibir y es importante que nosotros lo sepamos porque hay determinadas determinadas medicación que afecta a los estudios de mostaza en la identificación del paciente actualmente los laboratorios cuentan con los códigos de barra que son leídos por los equipos y se realizan automáticamente las pruebas Pero esto no suplanta la rotulación por parte de El extraccionista en el momento de la misma el anticoagulante que vamos a utilizar
3:55 para las pruebas de mostasis es el citrato trisódico en una concentración de cero coma ciento nueve o cero coma 129 molar tres coma dos por ciento o tres como a los ocho por ciento respectivamente que son las concentraciones aceptadas por el comité americano de estándares en laboratorio clínico la sociedad internacional de hemostasia y trombosis la isht recomienda que los estudios se realicen en la concentración de tres coma dos por ciento pero el laboratorio debe estandarizar la concentración de citrato que utiliza y fijar los valores de referencia de acuerdo a dicha concentración la relación anticoagulante sangre es uno y nueve y se puede utilizar el la muestra conecta que utilizamos para realizar el hemograma y
4:41 otras pruebas en el laboratorio esta muestra puede ser utilizada para los estudios por métodos de biología molecular de factores protrombóticos que realizamos en hemostasis que son el factor cinco leiden el factor dos veinte 210 a y la mthf Por supuesto que la heparina no se debe utilizar para realizar estudios de mostasis porque la heparina si recordamos en la fisiología tiene se une a la antitrombina que es un inhibidor natural y aumenta su capacidad de inhibición Cuando tenemos hematocritos por encima del 55% la relación nueve a uno del tubo cae y
5:29 causa un exceso de citrato por volumen de plasma presente en el tubo lo que conduce a un exceso de Unión del calcio produciendo un efecto dilucional que tiende a prolongar el tiempo en las pruebas de coagulación por lo tanto cuando sabemos que el paciente tiene un hematocrito por encima del 55% la concentración de citrato en el tubo debe ser ajustada y hay una tabla que de acuerdo al volumen que tenga el tubo Y el hematocrito del paciente es la cantidad de citrato la que tenemos que colocar en en el tubo y a su vez después en el momento de la extracción agregarle la sangre existe también una fórmula para ajustar el anticoagulante que relaciona el
6:16 volumen de citrato que vamos a utilizar el hematocrito y el volumen de sangre agregar y una constante que tiene en cuenta el volumen de sangre citrato y la concentración del sustrato existe a su vez un método simplificado que debemos descartar del tubo 0,1 ML de citrato de sodio de por ejemplo un tubo de cinco mililitros para el hematocrito 355 y 65 y trabajamos con un volumen final de 5 mililitros pero si nosotros queremos saber de acuerdo a ese valor de hematocrito que tiene el paciente nos debemos fijar en la tabla y ajustar los valores que corresponden por ejemplo en una hematocrito de 65 el volumen ideal de de
7:03 citrato que tiene que haber es cero coma 17 de acuerdo a los distintos volúmenes de los estos son los efectos que tienen los distintos anticoagulantes en proteínas de las coagulación y en pruebas que realizamos en el laboratorio por eso es que explicamos lo de utilizar para las pruebas de coagulación El tres coma dos por ciento de ese trato y no otros anticoagulante por ejemplo el apt en realizado en citrato de sodio tres coma dos por ciento da una media de 29 y un Rango Entre 25 y 33 pero si uso electa ya la media me aumenta y el rango
7:52 también aumenta lo mismo que la heparina porque no coagula mayor a 180 segundos y en el suelo obviamente porque el suero no contiene factores ni fibrinógeno el el valor se alarga e incluso no Coahuila Lo mismo sucede con el tiempo de protrombina con una media de 12,4 en el citrato y aumenta en nosotros en los otros tubos en el de heparina obviamente aumenta por encima del valor y lo mismo en el suelo y él de rbt que es una prueba que se utiliza para para determinar anticoagulante lúpico es un apt lo mismo pasa con este cuando se utiliza citrato es el correcto y los otros tubos veo valores aumentados
8:38 por ejemplo el factor 8 de la coagulación tiene una media entre ciento de 141 con un Rango entre 80 y 202 y vemos Que en alerta este valor disminuye muy bajo entre dos y diecinueve o siete coma cinco la media en la heparina Esta es casi indetectable y en el suelo también en inyectable en el caso de el factor 8 si se realiza la extracción en elta por error y se separa la muestra sin saber que esa muestra conecta y le solicitan al paciente por ejemplo el inhibidor de el factor 8 que es una prueba que se realiza el simula la acción del inhibidor del factor 8 por lo tanto si realizamos más
9:24 la extracción y sin querer utilizamos el tubo de Delta estamos falseando el valor obviamente se se tiene que tener en cuenta que en el momento de la extracción eso no debe pasar en lo posible siempre corregirlo si no tenemos al paciente bueno se comunicará el laboratorio se comunicará con el paciente y le dirá que tenemos tendrá que realizarse una nueva fracción pero los otros tubos no se deben utilizar para las pruebas de coagulación los tubos tienen que ser de plástico o vidrio siliconado se deben mezclar por inversión el volumen ideal que decíamos nueve partes de sangre y una parte de anticoagulante y a menor volumen de sangre mayor proporción anticoagulante plasma lo que provoca prolongación de
10:10 los tiempos la extracción debe ser de una vena de fácil acceso evitar áreas donde haya hematomas o cicatrización extensa evitar ejercicios excesivos de la mano como muchas veces se hace para que a veces tendemos a pedirle al paciente que mueva la mano porque eso aumenta las venas que que se ven en el brazo y antebrazo no se aconseja realizar utilizar sangre capilar y la sangre venosa debe ser obtenida por punción rápida y precisa y evitar la formación de espuma el Éxtasis venoso por colocar el torniquete más de un minuto y la contaminación controloplastina tisular en el caso de la extracción con sistema del vacío los primeros tubos que se deben llenar son los frascos de hemocultivos y le solicitan al paciente
10:57 en segundo lugar los secos luego coagulación hemograma velocidad de procedimentación y los tubos con otros aditivos Como por ejemplo la heparina de litio y los tubos secos al final pero si la extracción se realiza con jeringa se debe llenar primero el tubo de coagulación obtuvo de citrato la sangre arterial si se utiliza también tiene que ser por función directa no traumática evitar la extracción por catéter de pacientes internados en caso de tener que realizarlos se solicita que se haga con doble jeringa y se deben descartar los cinco a diez a diez mililitros primeros que se extraen de la vía y luego extraer la sangre para llenar los tubos se deben sentir las muestras en el laboratorio antes de las dos horas en lo
11:43 posible y ser procesadas antes de las cuatro y si no vamos a utilizarlo en el momento debemos separar el plasma con pipetas de plástico no se debe utilizar en ningún momento para hacer pruebas de mostasis tubos de vidrio porque el tubo de vidrio activa el sistema de la coagulación activa las plaquetas cuando se coloca la sangre entera los tipos de muestra que que utilizamos para hacer pruebas de coagulación son el plasmas y tratado rico en plaquetas que se obtiene manteniendo los tubos en posición vertical y destapados para obtener el plasma rico y se utiliza para realizar pruebas de función plaquetaria después tenemos el plasmado pobre en
12:29 plaquetas que debemos centrifugar la muestra diez minutos a tres mil quinientas revoluciones por minuto y es un plasma relativamente pobre en plaquetas si realizamos un conteo de ese plasma deberíamos tener menos de Diez mil plaquetas por milímetro cúbico Y tenemos el plasma citado libre de plaquetas en el cual realizamos una doble centrifugación primero centrifugamos el tubo original diez minutos a tres mil quinientas revoluciones y luego separamos el plasma de ese tubo en otro tubo de plástico y lo volvemos a centrifugar 10 minutos a 3.500 y deberíamos tener en ese plasma menos de cinco mil plaquetas por milímetro cúbico y es el plasma indicado para realizar la prueba de anticoagulante lúpico las causas de rechazo de las muestras muestras coaguladas por supuesto no se
13:15 deben ser utilizadas muestras hemorizadas dipémicas activadas muestras que estén mal enrasadas que tengan menos del 90% de la sangre que debe tener el tubo y las muestras que son tomadas de catéter sin el descarte recomendado en hemostasis utilizamos una muestra particular que la podemos preparar nosotros mismos que es el pool de plasmas normales que lo podemos utilizar como control normal o para realizar pruebas de mezcla que vamos a ver más adelante estas muestras para realizar el pool de plasmas normales se pueden obtener de 10 a 20 pacientes con un básico de coagulación normal y se prepara el plasma pobre en plaquetas el mismo se fracciona y se conserva A menos 80 grados hasta seis meses o solo un mes
14:02 si se guarda A menos 20 grados las interferencias que tenemos en las muestras son las ya conocidas que es la hemólisis lectericia y glicemia demólisis en lo que hace es una interferencia analítica por exposición de la hemoglobina y obviamente las muestras hemonizadas tienen color por lo tanto van a interferir con los métodos cromogénicos que utilizamos en coagulación lo mismo la rotura de las células provoca exposición de fosfolípidos de las membranas y es una interferencia biológica porque para muchas pruebas de coagulación por ejemplo la anticoagulante lúpico que utiliza
14:48 fosfolípidos si nosotros le agregamos más fosfolípidos de lo que debe tener la prueba esto puede dar falsos falsos valores a su vez una vez que se rompen las células exponen tromboplastina y que son es un agentes procoagulantes y provocan activación de la coagulación la ictericia se ha observado diferencias significativas en el tiempo de protombina El apt y el oceanógeno que son pruebas que vamos a ver en esta clase con bilirrubinas mayores a 13,6 miligramos de cilindro y en los casos de lipemia aumenta la actividad del factor siete y disminuye la actividad del factor 2 en 9 el 10 el 12 y el pie
15:35 el almacenamiento de las muestras de plasma rico en plaquetas puede almacenarse dos horas a temperatura ambiente pero debe ser utilizado el plasma antes de esas dos horas el plasma pobre en plaquetas y el plasma libre de plaquetas se debe procesar antes de las cuatro horas o frisar a menos 20 Durante un mes las muestras para hacer para realizar transporte de las mismas hacia otros laboratorio hacia otro lugar deben ser refrigeradas con hielo o frizadas con hielo seco en un recipiente adecuado para su conservación si vamos a transportar muestras de sangre entera estas no deben estar en contacto con el hielo porque el hielo hemoliza las muestras de sangre entera para usar plasma o reactivos congelados primero debemos descongelarlos rápidamente a 37 grados y al preparar
16:21 reactivos debemos dejarlos en temperatura ambiente durante 30 minutos antes de usar la preparación de los reactivos Generalmente vienen la cartilla que que realiza el fabricante de ese mismo y no se deben usar muestras congeladas y descongeladas más de una vez aquí tenemos el efecto de las muestras en diferentes condiciones de almacenamiento por ejemplo el tiempo de protrombina y el apt luego de realizar la centrifugación y se procesa tienen observamos valores entre 100 entre el tipo de petrombina que es 100% más menos cinco y el apt 36 segundos más menos cuatro pero luego de que el plasma ha sido mantenido durante ocho horas a 20
17:07 grados vemos como el tiempo de predomina disminuye y el apt aumenta y si se coloca a 37 grados el tiempo de predomina disminuye y el apriete aumenta aún más luego también los efectos del mismo de estas condiciones en los factores de la población por ejemplo los distintos factores el cinco El Siete el ocho y el nueve con una concentración luego de la centrifugación de cien por ciento cuando se mantiene la muestra durante ocho horas a veinte grados estos valores empieza a disminuir y se colocan a treinta y siete más disminuyen los valores porque el factor siete se activa por refrigeración por ejemplo es uno de los casos de activación de el factor 7
17:52 el factor cinco y el factor ocho son termolábiles por lo tanto si hacemos estos cambios de temperatura estos van a ver van a verse afectados actualmente en el laboratorio Contamos con técnicas totalmente automatizadas y equipos que realizan todas las pruebas de coagulación los cuales tienen Mayor bioseguridad Mayor productividad realizan tesco aubiliométricos tesis inmunológicos y colorimetricos y colorimétricos y hay menor variabilidad interlaboratorio los las muestras pueden ser leídas por código de barras tanto para pacientes como para reactivos Y estos mismos equipos contienen perforadores de tapa por lo tanto ni
18:39 siquiera es necesario sacar la tapa del tubo simplemente se identifica el tubo como decíamos y se coloca directamente en el equipo hay conexión para los sistemas informáticos en un laboratorio estos obviamente lo todo lo que es la automatización de Última Generación tiene altos costos los métodos de detección que tenemos en el laboratorio por ejemplo tenemos las técnicas foto ópticas y las nefalométricas que son basadas en el tiempo de absorbancia que se observa al producirse la malla de fibrina y aquellas que son basadas en la viscosidad o electromagnéticas se monitorea la formación del coágulo a través del cambio de la amplitud del
19:24 movimiento de una bolilla al formarse el Coahuila la viscosidad aumenta y la amplitud de creces tiene una ventaja de que estas estas técnicas pueden ser utilizadas en muestras histéricas lipémicas entre otras las muestras embolizadas si no deberían ser utilizadas por ningún método de detección en lo que respecta a los estudios que realizamos en el laboratorio de hemostasis para explorar la hemostasis vamos a tener aquellos que me hablan sobre integridad del sistema O sea me orientan hacia un trastorno específico y aquellas que me definen el sitio afectado por lo tanto vamos a contar con pruebas globales y pruebas
20:10 confirmatorias que me miden de forma específica el componente del sistema hemostático que estoy queriendo investigar Entonces tenemos las pruebas que exploran la hemostasis primaria como son de tiempo de sangría de Duque o de aire el recuento de plaquetas y su evaluación en el sangre periférica la agresividad plaquetaria la agregación y la agregación plaquetaria con inductores como son el adp la epinefrina y la ristocetina aquellas pruebas que exploran la hemostasis secundaria es lo que conocemos acá en nuestro medio como crasis básica que incluye el tiempo de protrombina el tiempo de tromboplastina parcial activado el tiempo de trombina y la dosificación de fibrinógeno por método de klauss el hidrógeno derivado o
20:57 el método gravimétrico y los factores de la coagulación también podemos investigarlos así como los inhibidores naturales y los inhibidores adquiridos y las pruebas que exploran que exploran la fibrólisis Contamos con el tiempo del Isis de globulina que puede ser realizado de forma basal o estasis venoso los productos de degradación de fibrinógeno los PDF los de dímeros que es un marcador de activación y diferentes componentes individuales del sistema frinolítico como son el plasminógeno el activador tisular de plasminógeno y el inhibidor del activador tisular del plasminoff
21:43 en tiempo de sangría por el método de adwbit de ID mide el tiempo que tarda en detenerse la salida de sangre provocada por una incisión estandarizada que se realiza en Los pequeños vasos superficiales tiene un valor normal entre dos a seis minutos y es muy útil como indicador de normalidades plaquetarias ya sea con respecto al número o la función este esta prueba puede estar influida por la ingesta de ácido acetilsalicílico y analgésicos no esteroideos está alterado en las trombocitopenias en el donar zurier en el idioma múltiple múltiple en la macroglobulinemia en los síndromes melodilácticos en la enfermedad de bombillo en el déficit de fibrinógeno en las leucemias y en la trombocitomía esencial no se debe realizar en conteos de plaquetas menores
22:29 a 50.000 Y tenemos otra prueba que es el tiempo de sangría de Duque que se realiza en el lóbulo de La Oreja de la oreja Pero es poco sensible la técnica de Ivy se realiza colocando el manguito que se utiliza para tomar la presión en el brazo apretado en una presión entre más o menos a 40 milímetros de mercurio e inmediatamente en el antebrazo se ubica la zona y con una lanceta se realiza la incisión Una vez que se realiza la incisión vemos que empieza a fluir la sangre se debe tener cuidado de no tocar la zona de en la que fue realizada la función simplemente los bordes de la misma y dejar que un papel absorbente absorba la sangre que va
23:15 saliendo Y a partir de ese momento que realizamos la incisión se larga un cronómetro y una vez que se detiene el sangrado es el tiempo de santería la densidad plaquetaria el método de referencia se llama método de gel 2 y estudia la capacidad de las plaquetas de quedar retenidas en una columna plástica que contiene perlas de vidrio a una velocidad constante de flujo de sangre la cual se obtiene utilizando una bomba de infusión se utiliza una bomba en la que se que es que se usan para la infusión de medicamentos y se debe hacer la extracción en una jeringa con sangre entera inmediatamente se debe colocar la
24:02 jeringa en esta bomba y conectarle una tubuladura que en su interior contiene perlas de vidrio la sangre empieza a entrar en contacto con esas perlas de vidrio y como sabemos las plaquetas tienen se pegan al vidrio porque es una superficie de carga negativa por lo tanto activa el mecanismo de la coagulación y lo que vamos a obtener es es un tubo pre que se realiza la extracción del paciente con un para contar las plaquetas que presenta este paciente y una vez que la sangre pasa por la columna de perlas de vidrio al final de la misma se coloca otro tubo Delta para recoger la sangre en un tiempo estimado y una vez que obtenemos los dos tubos se realiza el recuento de ambos y se se obtiene el valor de la
24:49 densidad Qué es el recuento de plaquetas pre el que él tuvo que saqué al principio es menos el recuento de plaquetas post pasados por la columna de perlas de vidrio dividido esa Esa primera concentración de plaquetas por 100 y el valor normal oscila entre los 45 y 85% las pruebas de agregación plaquetaria con inductores como son el adp lapinefrina y la ristocetina miden la miden la respuesta plaquetaria e identificación de una función anormal se utiliza la técnica de agregometría por transmisión de luz diseñada por gol en 1962 y para la agregación plaquetaria se utiliza plasmar rico en plaquetas que se
25:36 realiza la prueba a 37 grados el equipo que realiza esta prueba se le agregómetro que registra en forma continua los cambios de densidad óptica de un plasma rico en plaqueta luego que del agregado de un agonista al agregarse las plaquetas aumenta la intensidad de luz que atraviesa la cubeta y su intensidad se gráfica en función del tiempo es una detección por turbidimetría esta agregación plaquetaria requiere la preparación de un plasma pobre en plaquetas que se realiza por centrifugación rápida que a su vez lo utilizamos para la calibración de la transmisión de la luz que es este plasma claro plasma pobre en plaquetas se ajusta al 100% y la
26:21 transmisión de luz también por el plasma rico en plaquetas que es el plasma turbio opaco Entonces se ajusta el cero por ciento deben tener las mismas condiciones para las muestras de hemostasis los tubos como decían para obtener el plasma rico se dejan de forma vertical existe un valor estandarizado de plaquetas que debe contener ese plasma rico que está entre 200 y 300.000 plaquetas por milímetro cúbico si da mayor a 300.000 se debe diluir el plasma rico en plaquetas con el pobre del mismo paciente y en los casos de trombocitopenia con conteos menores a cien mil plaquetas pueden variar las curvas de agregación no una vez que tenemos el plasma rico en plaquetas se le coloca
27:06 el el agonista a esa muestra de plasma rica plaquetas el tubo para realizar la agregación contiene una varilla de metal que tiene un imán y el mismo simula la turbulencia que hay en la sangre una vez que agregamos el agonista esta estas plaquetas empiezan a agregarse si no hay ninguna alteración y empiezan a dejar libre el paso de la luz porque ese plasma inicial era turbio y una vez que se agregan están turbios por la cantidad de plaquetas que presenta pero una vez que se agrega el abolista las plaquetas empiezan a pegarse agregarse unas con otras y dejan pasar más luz lo que vamos a ver en una curva en la cual empieza a aumentar ese valor basal que es bajo empieza a aumentar y
27:53 se la agregación se mide en dos zonas un cambio de forma el agregado del agonista el cambio de forma hay una primer onda y una segunda onda esto mismo es registrada registrado por una fotocelda por una computadora que es la que me va graficando la los agonistas son de la dp y la epilefrina que provocan agregación por activación de la glicoproteína uno B tres a el colágeno que provoca adhesión de las plaquetas las ristocetinas el provoca agregación por Unión a la gripe proteína uno B del de la proteína uno ve a factor también se puede utilizar ácido araquidónico que activa la coagulación la agregación por producción de chocoxano a2 este es el
28:39 equipo el el metro que presenta dos dos lugares para colocar muestras y se realiza el proceso que decíamos anteriormente la aplicación clínica de la agregación es que contribuye al diagnóstico de enfermedades hemorrágicas Y trombóticas como la enfermedad el síndrome de Bernal hay un síndrome que se denomina síndrome de La plaqueta pegajosa que provoca eventos góticos e hiperagregación a la dpinefrina y deficiencias de gránulos Alfa densos o ambos también se puede utilizar en el monitoreo de la terapia antiagregante y acá se ve una foto con las curvas de agregación Y estos agonistas se utilizan
29:24 en distintas concentraciones en una concentración baja y en una concentración alta para ver el efecto el tiempo de protrombina valora globalmente la vía extrínseca y la vía final común los del fibrinógeno el factor dos el cinco el siete y el diez el dos el siete y el diez que valora esta prueba son los factores vitamina kdependientes se utiliza para monitorear los pacientes que reciben terapia anticoagulante vía oral es una técnica coulométrica donde el plasma del paciente se mezcla con calcio y troncoplastina que es un extracto tisular que contiene mucho fosfolípido y factor tisular y esta mezcla activa el factor 7 y la vía extrínseca el mismo puede ser de origen de cerebro humano o
30:10 conejo placenta humana o recombinante estos reactivos actualmente no necesitan que se agregue calcio por fuera sino que viene ya preparada una trombo plastilina cárcel como resultado de la adición del reactivo al plasma se forma la fibrina y el tiempo que tarda en comenzar la formación del coágulo de fibrina en presencia del exceso de tromboplastina e iones calcio será el tiempo de para la misma se utilizan controles de nivel normal y anormal y la formación del coágulo puede detectarse visualmente o automáticamente mediante geometría turbodimetría o métodos electromecánicos la expresión de los resultados del tipo de protrombina se pueden expresar en segundos en ratio que utiliza el tiempo
30:56 de protrombina del paciente plasma problemas sobre un tiempo de protrombina de un plasma control o normal se expresan porcentaje de actividad que sale de la curva de calibración y a su vez se puede informar como inr que es la razón internacional normatizada pocos sienten internacional cuando hay prolongación aislada del tipo que trombina puede deberse a una deficiencia de factor siete cuando hay prolongación de tiempo protrombina con la asociación con otros trastornos en la población por ejemplo puede ser en la deficiencia de vitamina k o antagonistas la vitamina k como la warfarina los pacientes que reciben anticoagulantes orales en la enfermedad hepática en la mala absorción porque puede la mayor producción hepática puede haber
31:42 deficiencias vitamina k altas concentraciones de heparina no fraccionada inhibidores directos de la trombina la fibrinogenemia y difiriendogena la las coagulopatías dilucinales que suceden en las transfusiones sanguíneas masivas y a normalidades en en el ciclo y la vitamina k mutaciones Cuando tenemos un tiempo de protomina corto puede ser luego del tratamiento con factor 7 activador de combinante para realizar la curva de calibración se realizan diluciones seriadas del plasma que se utiliza como calibrador que puede ser un pool de plafas normales que corresponde a un 100% un calibrador comercial con valor preestablecido
32:28 próximo al 100% y se grafica tiempo de coagulación una escala lineal versus el porcentaje de protrombina en escala logarita y se determina el tiempo de coagulación del paciente que se interpola en La Curva con el valor de la actividad de tiempo de protrombina o porcentaje y debe calibrarse cada vez que cambia el lote de reactivo los valores de referencia para recién nacidos es son Entre 10 y 100% en niños 65 100% y en adultos 70 120 por ciento de porcentaje de actividad para estandarizar los valores de tipo de petrotrombina es que se utiliza el índice o razón internacional normatizada
33:14 el inr que es una corrección matemática de la tasa de tiempo de protrombina que permite ajustar las diferentes sensibilidades de los reactivos de tromboplastía El inr es la razón de tiempo de predomina que uno podría obtener si utilizara esa tromboplastina de referencia en el laboratorio en el pasado cuando no existía el inr los fabricantes de reactivo del tipo de protrombinas lo realizaban de distintos orígenes la tromboplastina provenía de cualquier origen ya sea de cerebro ya sea de de placenta humana entonces cada laboratorio tenía un reactivo con distintas sensibilidades por lo tanto los pacientes iban a estos laboratorios se obtenía un tiempo de petrombina en uno con el tiempo de protrombina en otro
34:00 pero una vez que se empezó a utilizar el inr permite la comparación de resultados entre distintos laboratorios y que sean reportes estandarizados de tiempo de tiempo las tromboplastinas comerciales presentan estas distintas sensibilidades por lo que son las mismas comparadas con un patrón internacional de dónde sale el índice de sensibilidad internacional o Izzi que corresponde a cada lote de tromboplastina y el Easy debe ser lo más cercano a uno porque esto aumenta su sensibilidad el inr está reservado para el control de tratamiento de pacientes que reciben anticoagulantes orales dicumarinicos en los demás pacientes el tipo de protrombina debe ser informado En porcentaje o en radio definimos al inr como la razón entre el tiempo de
34:47 protrombina del paciente en segundos dividido una media normal de tipo heteromina también en segundos elevado a la Isi que es el índice de sensibilidad internacional la media normal del tiempo de protrombina es una media geométrica de este tiempo de una población normal adulta de 20 muestras o más frescas de individuos sanos adultos procesados durante tres días consecutivos y acá abajo donde dice cálculo del inr es simplemente un ejemplo Para que vean Cómo se utiliza esta forma este índice internacional de sensibilidad es un parámetro que permite referir el valor del inr a una tromboplastina patrón internacional y tenemos el ISIS genérico y el Izzi
35:32 específico el genérico es el Easy que no es instrumento específico por ejemplo un Easy para detección manual o foto óptica y el específico es aquel que es informado para una combinación de tromboplastina instrumento en particular los fabricantes presentan en su cartilla de reactivo el Easy que debe ser utilizado en cada uno de los equipos que ellos mismos tienen por lo tanto vamos a ver que distintas marcas tienen distintos valores de Y estos deben ser colocados son los equipos para poder hacer los cálculos de llenar de correspondientes se espera que el inr tenga un valor determinado que va a depender mucho de lo que el médico vea de acuerdo a la
36:18 patología del paciente o al riesgo de sangrado pero se acepta que un inr entre dos y tres asegura un buen nivel de anticoagulación el tiempo de nómina refleja cambios en los niveles de los factores vitamina k dependientes como el 2 el 7 el 9 y el 10 la heparina no fraccionada actualmente en Rango en rangos terapéuticos no afectan el inr ya que los reactivos contienen inhibidores de heparina pero si el paciente recibió mucha heparina que supera las una unidad por mililitro se pueden ver tiempos predomina prolongados las heparinas de bajo peso molecular no afectan en general el inr solo concentraciones altas y tenemos actualmente lo que se llaman los
37:04 anticoagulantes nuevos o novaks que los pacientes que son antipoblados con por ejemplo a pizzatlán pueden presentar distintos grados de Prolongación de tiempo de producción los triglicéridos en una concentración mayor a 1.200 pueden afectar y definiógenos menor a 50 miligramos decilitro pueden modificar la validez del tipo de petronina como prueba de screen de la vía extrínseca las causas de errores frecuentes en esta prueba que pueden ser no utilizar la calibración por el lote de tronplastina no ajustar el 100% de la curva si se toma una media geométrica de ahí no utilizar un activo cuyo Easy sea informado para el sistema de detección que se está utilizando no recalcular la media geométrica de los normales para cada lote de tomo plastilina
37:51 el inr es una determinación que está influenciada por el operador ya que este debe determinar la media geométrica del laboratorio e introducirla al equipo cada vez que cambia el lote e introducir a su vez también correctamente el los coeficientes de variación de los diferentes programas de evaluación de la calidad son en muchos casos mayores al 10% la otra prueba que es el tiempo de troncoplastina parcial activado o apt valora globalmente la vía intrínseca y la vía final común calicreívinas que ninógeno de alto peso molecular los factores ocho nueve once y doce se utiliza para monitorear pacientes que reciben terapias con heparina no fraccionada es una prueba poco sensible a las variaciones de factor dos Y fenógeno sí se ve alterada en
38:38 concentraciones de fibrinógenos menores a 50 miligramos de cilitro también es una técnica coagulo métrica cuyo fundamento se basa en la mezcla del plasma del paciente con calcio y fosfolípidos que es la tomo plastilina parcial cofactores requeridos y un activador del mecanismo intrínseco que puede ser sílica caolín celite o ácido láctico la adición de cloruro de calcio acero coma cero veinticinco molar aporta el calcio que es secuestrado por el anticoagulante y el tiempo que tarda en comenzar la formación del coágulo de fibrina es el apetente Se informa en segundos y se comporta de forma inversa la actividad en conjunto de los factores involucrados pueden ser informada en ratio que es el cociente entre el apt del paciente y el apete de un club de
39:24 plasma normales pero los valores de referencia o normales deben ser determinados por cada laboratorio porque varían según los equipos y los reactivos pero se acepta que entre un 25 y un 40 por 40 segundos Es aproximadamente el valor de referencia del relativo que se debe utilizar para ptt debe ser estable de poca variación inter e intralote presentar sensibilidad apropiada para ser utilizado como reactivo es deseable que un reactivo para ser utilizado como prueba cumpla con ser sensible a la presencia de heparina no fraccionadas el sensible a la presencia de inhibidores adquiridos por ejemplo el lútico inhibidor específico de un factor o ser sensible al déficit ligero de factores para seleccionar un reactivos
40:11 se deben utilizar plasmas con características mencionadas y observar el comportamiento de los distintos activos con cada uno de ellos cada laboratorio debe establecer su diferencia y este valor de referencia hallado con si este valor de referencia hallado coincide con el referido en el inserto del fabricante se puede utilizar dicho Rango de referencia como propio De no ser así se debe realizar en el mismo laboratorio el rango de referencia este Rango debe ser debe tener una variación como media de más menos dos débiles estándar y se debe utilizar o el percentil entre el quinto y el 95 para determinar los valores de referencia del
40:56 laboratorio cuando hay prolongación aislada de la ptt puede deberse a deficiencias de los factores de la vía intrínseca Puede ser normal en deficiencias leves solo valores menores a veinte o treinta por ciento pueden prolongar el app la deficiencia inhibidores adquiridos de la población inhibidores contra otros factores o anticoagulante lúpico o inhibidor lúdico una prolongación del apriete con prolongación del tipo de trombina Se observa en la deficiencia de la vitamina k en la enfermedad hepática en las vías individuales directos de la trombina en la coagulación intravascular diseminada en coagulo patías dilucinales en el tratamiento de trombótico deficiencias combinadas de factores de la población y deficiencias de la vía final común
41:44 prolongación de la ptt con una leve prolongación de tipo trombina puede deberse alpalina no fraccionada o anticuerpos antifos lipídicos inhibidores adquiridos de factores y la warfarina pttp corto pues deberse al ejercicio físico porque favorece la liberación de factor ocho por el endotelio en las infecciones inflamaciones y en la dificultad de la extracción de la muestra por ejemplo cuando sucede activación de la coagulación Cuando tenemos una prolongación o alteración de las pruebas básicas tanto del tiempo de metronina como el apt vamos a realizar en el laboratorio los ensayos de mezcla con plasma normal en los cuales vamos a tener tres tubos para ensayar el paciente la mezcla de plasma normal y la mezcla compra más normal y
42:30 el plasma normal en sí Una vez que se descartan las causas de alteración por ejemplo ejemplo cuando tenemos un tiempo de patrón bina alterado vamos a tener el tiempo de patronomina del paciente el tiempo de protrombina del plasma normal y el tiempo de protrombina de la mezcla Cuando tenemos este tiempo abdominal alterado en los cuales se descartaron todas las posibles causas que ya estuvimos hablando y tenemos un apete normal realizamos una mezcla con plasma normal en una proporción uno a uno o sea la misma cantidad de plasmar El paciente que plasma normal partes iguales en los cuales vamos a tener un resultado que puede ser que no corrija O que corrija si no corrige esta alteración en el
43:15 tiempo de predomina vamos a realizar la búsqueda de algún inhibidor que está interfiriendo con esta determinación Y si corrige vamos a realizar la dosificación de los factores de la vía extrínseca porque alguno puede estar en deficiencia que es lo que está provocando que el tiempo de protrombina se altere ocasionalmente puede ser la deficiencia el valor de corte o cálculo de porcentaje de corrección se realiza a través de el tiempo de predomina del paciente más el tiempo de petrombina del plasma normal dividido dos el cual vamos a tener un porcentaje de corrección que debe ser Comparado con el cálculo de tiempo de predomina de la mezcla si el tiempo de predomina de la mezcla es mayor o igual al porcentaje de corrección decimos que corrige Y si el
44:02 tiempo de predomina de la mezcla es menor el porcentaje de corrección no corrige lo mismo realizamos con el apt Cuando tenemos una apt alterado de lo cual la muestra se descartó cualquier alteración tenemos el resto de las pruebas normales se realiza la mezcla en partes iguales con plasma normal y obtenemos lo mismo si corrige o no corrige o prolonga si corrige puede ser un déficit de los factores de la vía y si no corrige o prolonga puede ser la presencia de un inhibidor y los inhibidores que alteran el apt pueden ser el anticoagulante lúpico por un lado o un inhibidor de factor específico por ejemplo el inhibidor del factor 8 para calcular este porcentaje este valor
44:50 de corrección en el caso de la ptt se utiliza el índice de rondas vamos a tener el apt del paciente el de la mezcla y el de plasma normal y el cálculo del índice de rosne se realiza el apriete de la mezcla menos el apt de la más normal dividido el apt del paciente por 100 y se estima que me apetea habrá corregido si el valor del índice de rosner es inferior al 10% Por otra parte no habrá corregido si el valor del índice es superior al 10%. a su vez existe una zona de incertidumbre entre doce y quince por ciento que cuando dan esos valores porque decimos que aquellos que son que no que no que corrigen que no corrigen son superiores al diez por ciento estaríamos ante una zona que llega más o
45:38 menos hasta el 15% en los cuales lo más probable es que es que se solicite una repetición de la de la muestra el médico va a solicitar una repetición de esa misma el tiempo de trombina evalúa la última etapa de la población es decir la conversión del fibrinógeno a fibrina e informa de la cantidad y calidad del cilindro se utiliza para detectar la presencia anticoagulantes en la muestra como son anticuerpos antitrombinas heparina inhibidores directos de la trombina O normalidad hereditarias o adquiridas del fibrinógeno es sensible a la presencia de heparina no fraccionada y poco sensible a la concentración de parinas de bajo peso molecular se puede emplear trombina bovina purificada como
46:23 reactivo el fundamento es la mezcla de volúmenes iguales del plasma y la y el reactivo que tiene trombina pre incubada 37 grados y el tiempo en que demora en formarse el coágulo será el tiempo de trompito la trombina se utiliza con un diluyente o tampón conservante en forma tal que la concentración de trombinas eran que será necesaria para que el plasma control coagule y que se obtenga un tiempo de coagulación entre doce y veinte segundos los pacientes con tratamiento crónico con humanismo presentan tipo Entre cuatro a seis segundos mayores que los pacientes que no reciben medicación se ve afectado por anomalías quali cuantitativas de fibrinógeno concentraciones de PDF mayores a 40 microgramos por mililitros pueden
47:08 prolongar el tiempo de trombina y el tiempo de trombina recién nacido se está prolongado respecto al del adulto por la presencia de fibrinógeno fetal que tiene mayor contenido de ácido oceánico los valores de referencia rondan entre 13 a 15% se utiliza una concentración de trombina de 4,6 unidades y entre 17 y 21 segundos para concentraciones de dos con siete unidades estrinógeno por método de klaos que es el método de referencia Claus en 1957 diseñó un método que consiste en agregar trombino plasmas tratado del paciente pobre en plaquetas diluido en una sola solución taponada este método se basa en formación de hidrógeno en fibrina y es la medición del tiempo de coagulación de
47:55 un plasma diluido al décimo de presencia de exceso de trombina de manera que el tiempo sea inversamente proporcional a la concentración de se debe incorporar el resultado en una curva de calibración obtenida con un calibrador de concentración conocida en diferentes diluciones el valor de referencia debe ser determinado por cada laboratorio laboratorio que generalmente rondan los 200 a 400 miligramos el nivel mínimo de necesario para la coagulación es de 60 miligramos de signos tenemos fibrinógeno elevado por ejemplo cuando en personas mayores de edad dependiendo del sexo también puede verse alterado tiene variaciones según las estaciones en el embarazo en la administración de conceptivos orales la
48:42 mujer postmenopáusica en las reacciones de fase aguda porque es un reactante de fase aguda cuando se en los fumadores en el ejercicio físico intenso y en malignidades y en fibrinógeno disminuido en la fibrinogenemia que es la ausencia de fenógeno la hipofinogenia la enfermedad hepática descompensada la hepatitis virales la coagulación intrafacular diseminada y en la hemodilusión el fibrinógeno derivado es otro método que se utiliza en el laboratorio que es obviamente es más barato porque utiliza el mismo utiliza un solo reactivo no utiliza dos como el fenógeno de clavos eh vamos a utilizar un reactivo para el fibrinógeno uno para ptt uno para tiempo de trombina y en el caso de fibrinógeno
49:28 derivado se mide el fenógeno funcional en los coágulosmétricos con sistema foto ópticos puede determinar la concentración de fibrinógeno a realizar el tiempo de petrotrombina que mide la dispersión de la luz producida durante el proceso de fibrino formación esta dispersión luminosa asociada al inicio de la coagulación corresponde al tiempo de protrombina Mientras que el incremento total de la turbidez producida por la coagulación completa del plasma es directamente proporcional a la concentración de felinos es una técnica que muestra una buena correlación con el método de clauss para valores de fibrinógeno dentro del Rango normal pero fuera de ese Rango es necesario realizar la determinación por método de klauss así como para pacientes que están recibiendo anticoagulantes orales antivitamina K o anticoagulantes directos
50:13 la determinación de factores de las vías tanto intrínsecas como extrínseca en el caso de la intrínseca se utiliza el plasmado del paciente diluido al décimo va a ser de orden es una mezcla con un plasma deficiente en el factor a estudiar y a dicha mezcla se realiza el apt el resultado se interpreta utilizando una curva de calibración obtenida a partir de diluciones de un calibrador mezclado con el reactivo de plasma deficiente y este plasma deficiente en el factor a estudiar no podrá compensar la ausencia del factor de coagulación del paciente va a resultar en un alargamiento de la ptt por lo tanto por ejemplo para determinar el factor 8 vamos a utilizar un plasma deficiente factor 8 por lo tanto el único que va a estar va a estar en la mezcla con este reactivo va a ser y va a
51:01 estar presente es exclusivamente el factor 8 del paciente entonces podemos valorar el factor ocho propio del paciente y no lo que le estamos agregando por fuera lo mismo para los factores de de la vía extensiva se utiliza la mezcla del paciente al décimo y el resultado se interpreta utilizando una curva de calibración Exactamente lo mismo son las más deficientes en el factor a estudiar y no está este plasma deficiente no podrá compensar la ausencia del factor de la coagulación del paciente resultando en un alargamiento del tiempo de los inhibidores naturales de la coagulación la titrombina son métodos funcional cromogénico basado en un sustrato cosmogénico sintético y una inactivación del factor días activado
51:47 donde la muestra se incuba con un exceso de trombina o factor desactivado en presencia de heparina luego deformado un complejo heparina antitrombina factor dio dos factores desactivado la enzima residual actúa sobre un sustrato cromogénico específico el cual libera penitronidina cuyabácea se cuantifica a cuatrocientos cinco nanómetros y el color desarrollado es inversamente proporcional a la concentración de antitromblina se sabe que la concentración aproximadamente detroina ronda los ochenta por ciento en el caso de la proteína c es un test funcional cromogénico el cual mide la proteína c en el plasma en dos etapas una incubación del plasma con un activador de la proteína C Que es un veneno de una víbora de una cascabel
52:35 y la cuantificación de la proteína c activada usando un sustrato cromogénico sintético que se envía 405 nanómetros y el nivel es directamente proporcional a la actividad de proteínas y los valores están entre 70 y 140 por ciento la proteína es esta presente en el plasma de dos formas una proteína s libre una proteína es ligada a la proteína transportadora de la fracción c cuatro B del complemento solo la proteína s libre tiene actividad funcional como cofactor se utiliza un inmune ensayo automatizado para la determinación de esta proteína a través de tu simetría de partículas de látex y la presencia de proteína s se determina midiendo el incremento de turbidez
53:20 debido a la aglutinación de dos reactivos de latas el lado de aglutinación será directamente proporcional a la concentración de proteína de ser libre en el paciente los valores de proteína s son varían según la edad y el estado hormonal en mujeres en la mujer el valor de referencia del 54 y 123% y en el hombre 74 146% en las pruebas de ferenólisis la alteración de este equilibrio ya sea por activación o inhibición producen síntomas hemorrágicos o trombóticos respectivamente y algunas de las pruebas que se utilizan son el tiempo de lisis de bulobulinas El plasminógeno el Pai el tpa la Alfa dos antiplasmina El inhibidor de la fibrinolisis está activado potrombina y los productos
54:05 generados como son los PDF y los deditos el tiempo de lisis de globulina la celulobulina son la fracción proteica que contiene fibrinógeno y el plasminógeno y la plastilina y estas fracciones precipitada por acidificación en ácido acético diluido el sobre nadante se elimina porque contiene inhibidores de la fibrinólisis y luego es re suspendido el seguimiento en un buffer alcalino y coagulado a 37 grados para luego controlar el tiempo en que tarda en deslizarse el coágulo el valor normal es superior a 120 minutos y tiempos menores indican aumento de la actividad fitnolítica por activadores del tiempos mayores indican disminución de la actividad los productos de degradación de hidrógeno se obtienen de la degradación de fibrinógeno por acción de la
54:52 plastilina e indican formación y posterior lisis del coágulo aparecen en la hiperfiriólisis o en la terapia con estreptoquinas aumenta con el ejercicio físico intenso luego de cirugía coagulación intravascular diseminada de tromboembolismo pulmonar enfermedad trombólica venosa enfermedad hepática trasplante hepático es un método Semi cuantitativo por la aglutinación de partículas de látex recubiertas con anticuerpos monoclonales contra PDF y los valores referencia es menor a 5 miligramos eh microgramos Por milímetro los dedímeros la presencia de los leímeros indican proteólisis de la fibrina por acción de la plastilina lo
55:37 que indica que un coágulo se formó y está siendo degradado es un marcador de activación de la población en vivo es el que tiene mayor aplicación clínica encontramos niveles aumentados en el curso de las trombosis venosas profundas o en el trombolismo pulmonar y podemos observarlo en otras condiciones como es la coagulación intravascular seminada la sepsis complicaciones del embarazo traumas cirugía mayor cáncer y en el embarazo en el envejecimiento los dedímeros aumenta todo esto limita la especificidad del aumento del dedímero en el diagnóstico de la enfermedad tromboembólica pero presenta un alto valor predictivo negativo entre un 99% más o menos el dedímero representa una familia de especies moleculares de productos de degradación de la fibrina
56:23 que tienen en común cantidades variables de dominios de Unidos por enlace y un grado variable de actividad plástica la formación de dedímero se inicia cuando la trombina corta el fibrinógeno dando origen a los monómeros de fibrina los monómeros se exponen un sitio críptico que les permite polimerizar formando primero protofibrillas solubles de fibrina que luego se integrarán en una trama más compleja e insoluble en un tronco de manera simultánea la formación de las fibrillas la trombina activa al factor 13 que va Unido este factor 13 activado entre cruza de manera covalente dos dominios de monómeros de fibrina adyacentes presentes tanto en las protofibrillas solubles como en el trono en El Paso
57:08 final la plasmina formada por acción proteolítica de el tpa sobre el platinogeno la superficie del trombo corta la masa de fibrina en sitios específicos dando origen a productos de degradación de la fibrina de diferentes pesos moleculares incluido producto final constituido por el complejo de dímero y el fragmento e numerosos estudios de validación clínica han demostrado que la determinación cuantitativa de de dímero tiene un alto valor predictivo negativo alrededor de un noventa y nueve por ciento esto permite emplearla como criterio de exclusión de trombosis venenosas profunda o son buenismo pulmonar un resultado dentro del rango de la normalidad en pacientes de bajo riesgo clínico en Quienes se sospecha tal condición con respecto al valor predictivo positivo el de dímero se
57:54 emplea tanto en el diagnóstico como en el monitoreo de la población intravascular diseminada y de manera reciente para la predicción de la recurrencia de trombo de trombosis venosa profundo Cómo se mide elímero en el laboratorio tenemos numerosos métodos en el mercado con distintos formatos y distintos fundamentos por ejemplo los ensayos cualitativos semi cuantitativos y cuantitativos también se clasifican en métodos utilizados en los laboratorios y aquellos que son los resultados no son intercambiables de los distintos métodos de laboratorio y tampoco con los de tipo tiene una dificultad cuando que
58:40 corresponde a que no hay un calibrador internacional y en una casa de estandarización de la técnica y cada técnica de demostrar su eficacia en esa sus diseñados para esa prueba la mayoría de las técnicas utilizadas tienen un buen grado de correlación la técnica ideal las características de las mismas que tiene que ser cuantitativo tiene que tener una buena sensibilidad un amplio Rango de medida resultados precisos cerca del punto de corte y una escasa reacción Cruzada con los PDF tiene que ser rápido disponible en 24 horas todos los días de la semana y aceptable en muchos coágulos metros un punto de corte bien establecido y que sea evaluado en ensayos clínicos adecuados el desarrollo de anticuerpos monoclonales que reconocen sitios
59:25 antigénicos presenten El dominio de solo se está Unido de forma covalente a otro dominio de dio origen a la elaboración de métodos de laboratorio que permiten medir de forma sensible y especifica al verímero presente en el plano la vida media desde el ímero es de varias horas lo que le otorga una calidad analítica superior frente a otros marcadores de activación como el freno péptido a o el fragmento uno más dos de la protrombina la aglutinación semi cuantitativa de partículas de látex constituyó la primera generación de ensayos de dedímero las nuevas generaciones incluye incluyen estos tés cualitativos que hablábamos que son más sensibles con formatos de fases sólida o inmunotromimétricos pasibles de automatización y por lo tanto aptos para
1:00:12 la determinación de urgencia así como los métodos de Point cuyo desarrollo se orienta a la exclusión de enfermedad tromboembólica las técnicas de aglutinación de partículas de látex pueden ser manuales semi cuantitativas tienen baja sensibilidad pero pueden dar falsos positivos a presencia del factor reumatoideo por ejemplo no tiene sensibilidad para ser utilizado en la exclusión de trombosis venosa profunda o trombolismo pulmonar la aglutinación de micropartículas de látex de alta sensibilidad es un método automatizado cuantitativo sensible en el orden del 40 y 100 nanogramos por mililitro de dímeros las partículas de látex recubiertas de anti monoclonales específicos aglutinan en presencia de productos de degradación de la fibrina y
1:00:57 esta alucinación resulta en una dispersión de la luz más fuerte que se mide como aumento de la densidad óptica el cambio de densidad óptica se ve en la curva de calibración los plasmas libémicos pueden interferir subestimando los niveles de dímero y se puede a veces obtener falsos positivos en presencia de anticuerpos heterótrofos o factor reumatoide la mayoría de la asociación comerciales han sido validados para la exclusión de profunda y tomamos pulmonar las técnicas de Lisa pueden ser manuales a su vez si estas pruebas son manuales no son aptas para la urgencia por el tiempo de respuesta pesa más o menos entre dos horas pero tiene una sensibilidad entre Entre 10 a 10 a 40 nanogramos por mililitro este tipo de
1:01:44 ensayo no interfiere ni la lipemia ni los anticuerpos heterológicos heterófilos ni el factor reumatoide las técnicas de inmuno fluorescencia o elfas son otras de las técnicas que se utilizan que son automatizadas rápidas y diseñadas para la urgencia las características son las mismas que Para Elisa con la ventaja de tener un tiempo de análisis de uno más o menos 40 minutos la inmune filtración inmuno cromatográficas son técnicas de Pointer que se puede utilizar plasma o sangre parinizada son fáciles de usar y no requieren una formación especial para manejar el sistema pueden ser
1:02:30 cualitativos o cuantitativos y se combinan con sistemas de lectura por ejemplo hay una prueba que es cardiac de dímero se llaman que es combinada con el sistema de lectura no necesita calibración manual los resultados cuantitativos están disponibles en ocho minutos con los límites de sensibilidad de 100 nanogramos por mililitros no requiere mantenimiento y han sido validada para la exclusión de trombosis venosa profunda con una performance comparable con los métodos de cuantitativos e inmune ensayos con fluorescencia los ensayos comerciales emplean anticuerpos monoclonales con especificidades que no son idénticas y que pueden reaccionar de manera diferente frente a productos fibrina alto de alto y bajo peso molecular
1:03:23 los métodos más utilizados en nuestros medios son los inmunos 62% y aquellos que son por métodos de fluorescencia en un 14% los distintos ensayos que se utilizan para los dedímeros utilizan distintos calibradores En consecuencia existen dos tipos de unidades en las que se expresan los deditos y las unidades equivalentes de fibrinógeno o zeu y las unidades de delimetro además los resultados se pueden expresar en otras unidades de concentración como nanograma miligramos microgramos y otras el intervalo de referencia y puntos de corte los intervalos de referencia son determinados por El fabricante con un percentil 95 de la distribución normal individuos sanos y deben ser verificados
1:04:09 por el usuario en cada laboratorio el punto de corte para la exclusión de tromboismo venoso surge de Trabajo de investigación con series de entre 200 y 300 pacientes de donde se calcula la sensibilidad especificidad valor de adictivo negativo del ensayo para el diagnóstico de trombosis venosa los puntos de corte que son determinados por ejemplo en una encuesta latinoamericana presentada por el grupo clac Se observa que en la mayoría de los casos se utiliza un punto de corte de 500 nanogramos por mililitro de unidades f1 le sigue el 0,2 microgramos y los 200 nanogramas pero en la mayoría de los
1:04:56 laboratorios y las técnicas utiliza el punto de corte de los resultados de dinero realizados por distintos métodos no son intercambiables por lo tanto debe informarse de acuerdo a la unidad que especifica El fabricante Y no deben convertirse a otra unidad el plasminógeno que vamos a determinar en el laboratorio se sintetiza en el hígado y circula en dos formas el Blue lasminógeno y el lasminógeno en su forma nativa el plasminógeno contiene un residuo de ácido glutámico en el extremo en el
1:05:43 terminal de esta molécula que se denomina gluplasminógeno la activación del grupo a través del tpa o activador similar a la buroquinasa se produce a través de la extinción de dos aminoácidos para generar una molécula activa de dos cadenas la cadena pesada contiene los sitios de minoradicina mientras que la cadena ligera tiene actividad de Celina proteás sin embargo los sitios a la lisina en la cadena pesada están enterrados y por lo tanto esta molécula es funcionalmente inactiva la conversión catalítica de gluplasmina andis las minas se produce a través de la extinción de la cadena que provoca un cambio conformacional
1:06:29 significativo en su estructura y expone los sitios de Unión de lisina y permite la unión al coágulo infinite curiosamente tanto el is plasmina como gliplasmina pueden romper los enlaces entre lisinas y glúteos para formar las el glup lasminógeno tiene una vida media de 50 horas mientras que laminógeno tiene una vida media de 20 horas la plasmina es una proteasa es un componente clave en la vida frinolítica se convierte en su forma activa la plasmina mediante el activador tisularminógeno la conversión de plasminógeno a plasmina por el tpa es relativamente ineficiente en ausencia de un coágulo pero en presencia de fibrina la eficiencia de la conversión aumenta significativamente el plasminógeno
1:07:15 también se puede convertir en plasmina mediante el activador de plasminógeno tipo uropinaza el factor 11 y el factor 12 activados la plasmina esciende la filina en varios productos degradación en la fluinas solubles los PDF y los PDF inhiben la competitivamente la trombina factor dos activado y por lo tanto reducen la compresión de fibrinógeno la plastilina responsable tanto de la descomposición del coágulo como indirectamente de la reducción de la formación de coágulos además de su función fibrinolítica la plasmina también es sin de la fibronetina la trombofontina lamina el factor bombílebras y algunas colagenasas y algunos componentes del sistema de complemento tiene un papel en la
1:08:02 ovulación y la cicatrización de heridas por estas razones la actividad de plasmina está cuidadosamente regulado la plasmina es inactivada por la Alfa dosmina también conocida como inhibidor Alfa dosmina y también puede convertirse en angiostatina en un inhibidor de la angiogénesis por vía alternativa la deficiencia de plasminógeno se hereda de forma autosómica recesiva la escasez de casos hay hace que cualquier asociación Clara y la literatura publicada sobre riesgo trombótico asociado a la eficiencia es bastante contradictorio existen dos tipos de deficiencias tipo dos los ensayos que
1:08:49 contamos para plasminógeno reflejan los diferentes defectos potenciales como los ensayos inmunológicos existe una variedad de métodos inmunológicos para medir los niveles antigénicos de los ensayos de Elisa y los ensayos funcionales miden la actividad del plasminógeno que se puede ensayar mediante la activación de la plasmina ya sea por efecto quinasa o equinasa y luego midiendo la actividad funcional de la plasmina usando una variedad de sustratos los ensayos de lasminógeno cromogénico utilizan comúnmente una evaluación semifuncional de actividades el plasminógeno se activa en la mayoría de los ensayos por la estreptoquinasa que según el plasminógeno y lo convierte en la
1:09:35 plasmina siente un sustrato cromogénico específico y el cambio de colores directamente proporcional a la concentración de las para su interpretación primero se debe realizar el ensayo funcional si esto es normal es un poco probable que el paciente tenga una deficiencia si la prueba funcional indica una actividad reducida se pueden realizar pruebas de antígeno para distinguir los trastornos tipo uno y tipo dos vemos niveles de platógenos aumentados en la administración de esteroides anabólicos en el hipotiroidismo en los anticonceptivos hormonales en la
1:10:21 obesidad en el embarazo el plasminógeno
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