DNA isolation from chicken blood

DrThaigress www.youtube.com

สรุปย่อ

วิดีโอนี้สาธิตวิธีการสกัด DNA จากเลือดไก่ โดยเริ่มจากการเตรียมเลือดไก่ เติมสารเคมีต่างๆ เพื่อแยก DNA ออกจากเซลล์ จากนั้นทำการตกตะกอน DNA และล้างตะกอนให้บริสุทธิ์ ก่อนจะละลาย DNA ที่ได้ในบัฟเฟอร์ วิดีโอนี้เน้นความระมัดระวังในแต่ละขั้นตอน เพื่อให้ได้ DNA ที่บริสุทธิ์และมีคุณภาพ

  • การสกัด DNA จากเลือดไก่
  • การใช้สารเคมีต่างๆ เพื่อแยก DNA
  • การตกตะกอนและการล้าง DNA ให้บริสุทธิ์

การเตรียมเลือดไก่และสารเคมี

เริ่มต้นด้วยการเตรียมหลอดทดลองและตั้งชื่อกลุ่มตัวอย่าง จากนั้นดูดเลือดไก่ 20 ไมโครลิตรใส่ลงในหลอดทดลองที่เตรียมไว้ ต่อมาใช้ Auto Pipette ปรับปริมาตร 1,000 ไมโครลิตร (1 มิลลิลิตร) แล้วเติม Lysis Buffer ลงไปในหลอดเลือดไก่ คนให้เข้ากัน 1-2 ครั้ง สังเกตว่าเลือดไก่จะเริ่มใสขึ้น

การเติมสารละลาย SDS และ Incubate

เติม Sodium Dodecyl Sulfate (SDS) ซึ่งเป็นสารลดแรงตึงผิว ปริมาตร 50 ไมโครลิตรลงในหลอดทดลอง ผสมให้เข้ากัน นำไป Incubate ใน Heat Block หรือ Water Bath ที่อุณหภูมิ 55 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 10 นาที โดยทำการผสมหลอดทุกๆ 2-3 นาที

การเติมโซเดียมคลอไรด์และการตกตะกอนโปรตีน

เมื่อครบ 10 นาที นำหลอดออกมาเติม 6M โซเดียมคลอไรด์ ปริมาตร 300 ไมโครลิตร สังเกตว่าสารละลายจะขุ่นขึ้นเนื่องจากโปรตีนตกตะกอน นำไป Incubate ต่อที่ 55 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 5 นาที เพื่อให้การตกตะกอนสมบูรณ์ยิ่งขึ้น

การปั่นเหวี่ยงเพื่อแยกตะกอน

นำหลอดออกจาก Heat Block แล้วนำไปปั่นเหวี่ยงที่ 13,000 rpm เป็นเวลา 10 นาที โดยต้อง Balance หลอดให้ดีก่อนปั่น หลังจากปั่นเสร็จ จะสังเกตเห็นส่วนใส (Supernatant) และส่วนตะกอน (Pellet) ที่เป็นเศษเซลล์เม็ดเลือดแดง

การ Transfer ส่วนใสและการเติมไอโซโพรพานอล

ทำการ Transfer ส่วนใส (Supernatant) ประมาณ 700 ไมโครลิตรไปยังหลอดทดลองใหม่ โดยระมัดระวังไม่ให้มีตะกอนปนเปื้อน จากนั้นเติมไอโซโพรพานอล (Isopropanol) ปริมาตรเท่ากับส่วนใสที่ดูดได้ (เช่น ถ้าดูดส่วนใสได้ 600 ไมโครลิตร ก็เติมไอโซโพรพานอล 600 ไมโครลิตร)

การปั่นเหวี่ยงเพื่อตกตะกอน DNA

นำหลอดไปปั่นเหวี่ยงอีกครั้งที่ 7,500 rpm เป็นเวลา 5 นาที หลังจากปั่นเสร็จ จะเห็นตะกอน DNA สีขาวเล็กๆ บริเวณก้นหลอด ใช้ปากกา Marker วงรอบตะกอน DNA เพื่อให้สังเกตเห็นได้ชัดเจน

การล้างตะกอน DNA ด้วยเอทานอล

เทส่วนใสทิ้ง โดยระมัดระวังไม่ให้ตะกอน DNA หลุดออกไป เติม 70% เอทานอล (เย็น) ปริมาตร 1 มิลลิลิตรลงในหลอดที่มีตะกอน DNA อยู่ จากนั้นกลับหลอดไปมาเพื่อล้างตะกอน DNA นำไปปั่นเหวี่ยงที่ 7,500 rpm เป็นเวลา 5 นาที

การกำจัดเอทานอลและการทำให้ DNA แห้ง

เท 70% เอทานอลทิ้ง โดยระมัดระวังไม่ให้ตะกอน DNA หลุดออกไป นำหลอดไปผึ่งให้แห้ง เป็นเวลาประมาณ 15 นาที โดยเปิดฝาหลอดทิ้งไว้

การละลาย DNA ในบัฟเฟอร์

เมื่อ DNA แห้งแล้ว ให้เติม TE Buffer ปริมาตร 30 ไมโครลิตรลงในหลอด แล้วนำไปอุ่นที่อุณหภูมิ 55 องศาเซลเซียส เพื่อช่วยในการละลาย DNA

Summarize any YouTube video in seconds

Get summaries like this one for any video, in your language, with the free Summ app.

Download on the Apple Store
Get it on Google Play

Transcript

YouTube Transcript Generator

0:01 เหมาะสำหรับปฏิบัติการทำวันนี้นะคะเค้าจะ เป็นวิธีการประกัดีเอ็นเอจากเลือดไก่ค่ะ แล้วมาเริ่มทำการถ้ามองกันเลยนะคะขออัน อื่นให้เราเทียม ทดลองนะคะขนาด 1 จุดให้เราแล้วก็เร็วนะคะ เติมชื่อกลุ่มนี้จะยกตัวอย่างว่าดีนี่ลบ หนึ่งนะคะอ่ะ ออก มาจากนั้นให้เราอ่ากับ 11 ไปที่ 21 Police นะคะอ่ะ ม.ค ก็ เพราะใช้ทิพย์หลังนี้นะคะแล้วก็ดูดเลือด ใจมา 20 ในโคลิ

0:48 ม.คอ่า ใส่เข้าไปในหลอดทดลองเราเตรียมไว้ ม.ค พ.ย ดู หนังจากนั้นให้เราใช้ Auto ที่เป็ดปีภาพ นะคะแล้วก็ปรับร่วมไปที่ 1,000 ในโคลี หรือมันคือ 1 ML นั่นเองนะคะ ขั้นตอนต่อไปนี้เราจะเติม อะไรสิทธิ์บล็อกเฟอร์นะคะแล้วก็เทียมทุก ขนาดใหญ่ที่ใช้คู่กันกับพีพรรณนะคะอ่ะ

1:35 คะ แล้วก็ โหลดไรสิบรับเฟิร์นพี่นา ม.ค ขอแนะแนว เหรียญ แสตมป์เข้าไปในหลอดที่มีเลือดไก่ของเรา อยู่นะคะ ม.ค แต่ ถ้าจะดูดผสม 1-2 ครั้งนะคะก็เลือกไก่ เริ่มแตกมันจะเริ่มเป็นใสๆแดงๆวันนี้นะคะ อ่ะ มี อะไรนะคะเราจะเติมเป็นทรายนะคะบริษัท อีเอสค่ะเข้าไป โดยให้เรานำพิเศษสูตรพิเศษมานะคะแล้วก็

2:22 กลับพุ่งไปที่ 50 ในตัว L ค่ะอ่ะนัก ข่าวสายงานนะคะ พี่ นัสนะคะ List ผ้าใส่เข้าไปในทดลองของเรา ค่ะ หลัง จากนั้นผสมให้เข้ากันนะคะ แล้วก็เอาไปใส่ไว้ใน คิดล็อคหรือว่า water บาสที่ปรับให้ คุณภูมิมาที่ 55 6 สานะคะเป็นผู้ Base ไว้ 10 นาทีนะคะแต่ว่าให้พวกเราจับเวลา และก็มาผสมให้เข้ากันทุกๆ 2-3 นาทีด้วย

3:10 กันกลับหลอดไปมาแบบนี้ค่ะอ่ะ ก็ ไม่รู้เหตุครบ 10 นาทีแล้วนะคะให้เรานำ ออกมาเพื่อที่จะเติม 6 โมลาร์ โซเดียมคลอไรด์นะคะ ให้ปรับ Auto พิเศษไปที่ 300 บาทคะ ก็ดู 6 โมงล่าสุดลิ่มคอร์ดใครนะคะ 300 บาทคนนิด ม.ค และ ก็เติมเอาไปใน ที่เลาะนี้ across A

3:57 นี้เราจะเห็นว่ามันมีลักษณะเขาขาวๆขุ่นนะ คะจะมีโปรตีนรังส่วนมันตกตะกอนไปแล้วค่ะ เพื่อให้การตกตะกอน สมบูรณ์ขึ้นนะคะเราจะเอาไปหนูเกตุต่อที่ 55 องศาเป็นเวลา 5 นาทีอ่ะ เนื้อหาเมื่อคบเวลา 5 นาทีแล้วนะคะให้เรา นำออกมาจากฮีทบล็อครอต้มรัฐบาลนะคะแล้วก็ จะนำไปแต่งที่หนึ่งหมื่น 3,000 cm นะคะ แต่ว่าดันมีแค่หลอดเดียวก็เลยเตรียมหลอด ไว้ Balance นะคะรอที่ปริมาณเท่ากัน white balance ด้วยลองนำเข้าไปในเครื่องปั่นนะ คะแล้วก็ใส่ให้ตรงข้ามกันนะคะให้ Balance คดี จะเป็นตำแหน่งคลิก 1 กับเลข 13 มันจะ

4:47 Balance กันพอดีจากนั้นให้เราปิดฝานะคะ ติดขาด้านในก่อน 1 รอบแล้วก็ปิดฝานอกนะคะ อันนี้เป็นต่อ มีสปีดนะคะอาจารย์ใช้ 13,000 คินนะคะเป็น เวลาสิบนาทีหน้าจากนั้นแล้วก็ทำการกด start เลยค่ะอ่ะ อาหารอาจารย์รอแป๊บนึงนะคะรอให้เครื่อง มันทำงานไปที่ Max Speed มันก่อนแล้วก็ ดูว่าเครื่องไม่มีปัญหาอะไรนะคะจากนั้น เราก็ค่อยไปทำอย่างอื่นได้ค่ะ 10 นาที แล้วค่อยกลับมาดูเมื่อปั่นคบเวลา 10 นาที แล้วนะคะมันก็จะขึ้น M แบบนี้นะคะแล้วก็ กดเปิดฝาค่ะ

5:35 แล้วก็นำหลอดทดลองของเรามานะคะ เนื้อหาซึ่งรักษาจะสังเกตว่ามันแยกชั้น เป็นส่วนใสกับส่วนตะกอนที่เป็นเศษเซลล์ เม็ดเลือดแดงนะคะ ค่ะ จากนั้นนะคะเราจะทำการ transfer ส่วนที่ เป็นส่วนใสนะคะหรือว่าเอกเพื่อนเศษตรงนี้ ใส่หลอดทดลองหลอดใหม่นะคะอะที่เราเตรียม ไว้อาจจะรีบเร็วเหมือนเดิมก็ได้ค่ะอ่ะ ม.ค เนื้อหาการจะกลับไปเที่ยว 11 ไปที่ประมาณ 700 ในโคลิตรนะคะเราจะดูแลส่วนใส่แค่ 700 เราจะไม่เอาทั้งหมดนะคะเพราะว่ามันเสี่ยง ต่อการคุ้มของตะกอนนะคะ

6:25 อ่ะขั้นตอนนี้นะคะนักศึกษาต้องระมัดระวัง เป็นพิเศษห้ามดูดเอาส่วนที่เป็นตะกอนขึ้น มาเด็ดขาดค่ะคะ คะเดี๋ยว DNA ของเรามันจะไม่บริสุทธิ์นะ คะอ่ะ ม.ค และ เพื่อความสะดวกเราจะอาจจะเปิดฝารอไว้ก่อน ก็ได้นะคะอ่ะ เนื้อหาไปก็เป็นแบบนี้นะคะ ขั้นตอนต่อไปก็คือเติมไอโซโพรพานอลนะคะ เข้าไป Volume เท่ากันกับส่วนสายที่เรา ดูดได้ถ้ากลุ่มไหนดูส่วนใส่ได้น้อยกว่า นี้นะคะก็อ่าเช่นถ้าดูดได้ 600 ไมโครลิตร

7:13 ก็ใส่ไอโซโพรพานอล 600 ในโคลิคเช่นเดียว กันนะคะอ่ะ โน้ท ต่อ มาก็เติมลงไปค่ะอ่ะ มีอาจารย์อยู่แถว s700 ไมโครลิตรเพราะว่า อ่าเมื่อผสมกับอะไรส่วนผู้คนนอกแล้วนะคะ ลูกมันก็จะเกือบจะเต็มหลอดก็ดีนะจากนั้น กลับหลอดไปมานะคะเพื่อเป็นการผสมนะคะอ่ะ ถ้าเราก็นำหลอดแล้วนะคะพร้อมกับตลอดเวลา ร้านนะคะเข้าไปใส่ในช่องกัน

8:01 ทำเหมือนเดิมเลยก็คือวางหลอดให้ตรงข้าม กันนะคะให้ Balance พิษษาด้านในปิดฝาด้าน นอกเข้าปรับสปีดไปที่ 7500 rpm 5 นาที นะคะแล้วก็กดเล็กกับตาเธอเลยค่ะแล้วก็รอ ให้มันความเร็วมันถึงเจ็บพันห้าร้อยนะคะ อ่ะ เนื้อหาหลังจากครบเวลาแล้วนะคะเราก็เปิด เอาหลอดเราอ่ะอ่ะ เนื้อหา แต่ถ้าเราสังเกตดีๆนะคะเราจะเห็นขีดขาวๆ เล็กๆนะคะตรงคนหล่อนะคะอันนี้คือเป็น ตะกอนดีๆของเรานะคะเดี๋ยวนั้นจะเอาประกัน

8:48 เลยปิ้ววงตรงบริเวณนั้นไว้ให้เราเห็นชัด เจนขึ้นนะคะอ่ะ เนื้อหาอันนี้อาจารย์ใช้ปากกาเรเบลวงรอบ ตะกอนดิน a ไปแล้วนะคะหาถ้าพวกเราสังเกต ไม่เห็นนะคะแล้วก็อาจจะให้อาจารย์ประจำ กลุ่มช่วยดูนะคะ หลังจากนั้นเราจะเทส่วนใส่ทิ้งนะครับจะ ต้องระมัดระวังในขั้นตอนนี้อยากให้ตะกอน ดินดีของเราหลุดออกไปนะคะขั้นตอนต่อไปนะ คะจะสาธิตการทีตัดต่อการที่ส่วนสายทิ้งนะ คะแล้วก็แค่เนี้ยตะกอนดินเองของเราไว้นะ คะอ่า ที่ลงไปเลยค่ะ อ่าอันนี้ปกรณ์มันจะติดค่อนข้างแน่นนะคะ ยังไงก็ตามมาให้เราสังเกตว่าละครสีขาวมัน

9:35 ยังคงอยู่นะคะ หน้าต่อไปเป็นการเติม 70% คะนอกนะคะซึ่ง อันนี้จะเป็น 70% เน็ตนอกที่นำไปใช้ยืน ไว้ก่อนหน้านี้แล้วนะคะอ่ะ อิอิ ถ้าภาษาหยุด 70% เอทานอล 1 เย็น L นะคะ อ่า ใส่เข้าไปในหลอดที่มีตะกอนดินของเราอยู่ นะ พ.ย ค่ะจากนั้นก็ ก็กลับหลอดไปมานะคะ และเพื่อเป็นการล้างก่อนดีนี ม.คนักฆ่าจากนั้นนะคะเราก็จะนำไปปั่นที่

10:22 7,500 ทีเองเป็นเวลา 5 นาทีโดยจะใช้อีก หลอดนึงเป็นหลอดเวลานะคะก็เซ็ตอ่ะเซ็ต ความเร็วที่ 7500 ATM แล้วก็เวลาก็เป็น 5 นาทีอ่ะ โน้ท พ.ย สีขาวน่าคบเวลา 5 นาทีแล้วนะคะเราก็จะ หนัง อย่าหลอกที่ฝั่งเสร็จแล้วอย่ามา th ถนน

11:09 ออก ม.ค ดู ข่าวตอนนี้นะคะเราก็จะมองเห็นแต่ก่อนเป็น สีของขาวตรงนี้นะขอเวลา KS หั่นออกก็คือ ต้องทีอย่างระมัดระวังไม่ให้ตะกอนโดนใคร เขา ม.ค นักฆ่าจากนั้นก็นำมาขึงไว้ให้แห้งนะคะ เป็นเวลาประมาณ 15 นาทีค่ะโดยเปิดฝาหลอด

11:55 ทิ้งไว้นะคะ เขาเมื่ออากร DNA แห้งแล้วนะคะเราก็จะนำ ไปๆด้วยทีมากเฟอร์ปริมาตร 30 ไมโครลิตรนะ คะแล้วก็จะปรับที่เป็ดให้เป็นหาคิด ไมโครลิตร ถ้าฟังงานก็เติมลงไปในตะกอนนะคะอ่ะ คะค่ะแล้วก็เราอาจจะเอาไปอุ่นที่อุณหภูมิ 55 องศาเพื่อช่วยในการละลาย

12:44 ม.ค

Share

YouTube Video Summaries